JURNAL BIOLOGI UDAYANA 25(2): 197-207

P ISSN: 1410-5292 E ISSN: 2599-2856

Potensi Streptomyces sp. dalam menghambat pertumbuhan jamur Colletotrichum acutatum pada cabai merah besar (Capsicum annum L.) secara in vitro

Potential of Streptomyces sp. in preventing the in vitro growth of Colletotrichum acutatum, the causative agent of infection in Capsicum annum L.

Rochmalia Juniarti Putri, Retno Kawuri , A. A Ketut Darmadi, Inna Narayani

Program Studi Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Udayana,

Bukit Jimbaran, Bali, Indonesia - 80361

*Email:[email protected]

Diterima 24 Maret 2021 Disetujui 19 November 2021

INTISARI

Tanaman cabai merah besar (Capsicum annum L.) ialah salah satu tanaman sayuran yang sangat banyak diminati oleh masyarakat Indonesia. Salah satu faktor yang menyebabkan penurunan produktifitas cabai oleh serangan patogen adalah Colletotrichum acutatum yang merupakan salah satu jamur penyebab penyakit antraknosa. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui keberadaan bakteri Streptomyces sp. di rizosfer tanaman cabai besar, kemampuan isolat Streptomyces sp. dalam menghambat C. acutatum, Minimum Inhibitory Concentration (MIC) dari filtrat isolat Streptomyces sp. dalam menghambat C. acutatum. Isolasi Streptomyces dilakukan dengan metode pengenceran dan menggunakan media selektif yaitu Yeast Malt Agar. Uji daya hambat menggunakan metode Dual Culture antara Streptomyces sp. dengan C. acutatum secara in vitro. Uji efektivitas konsentrasi filtrat Streptomyces sp. dan MIC dalam menghambat C. acutatum, menggunakan metode sumur difusi. Data yang didapatkan dalam penelitian dianalisis dengan Analysis of Varian (ANOVA). Ditemukan 5 isolat Streptomyces yaitu Streptomyces sp.1, Streptomyces sp.2, Streptomyces sp.3, Streptomyces sp.4, dan Streptomyces sp.5 pada rizosfer tanaman C. annum L. sehat di Desa Daup, Kecamatan Kintamani, Kabupaten Bangli. Isolat Streptomyces sp. secara nyata dapat menghambat pertumbuhan jamur C. acuatum dengan daya hambat berkisar 50,30% sampai dengan 83,76%, Isolat Streptomyces sp.5 mampu memberikan persentase hambatan paling tinggi pada C. acutatum sebesar 83,76 ± 2,91% dengan MIC 7% (v/v) dengan diameter sebesar 6,40 mm.

Kata kunci: cabai merah, Colletotrichum acutatum, filtrat, MIC, Streptomyces sp.

ABSTRACT

Red chilli plant (Capsicum annum L.) is one of the most popular vegetable crops in Indonesian society. One of them the pathogens attacks is Colletotrichum acutatum, a fungus causing anthracnose on red chilli. This study aims to determine the existence of Streptomyces sp. bacteria in the rhizosphere of the red chilli plant; the ability of Streptomyces sp. in inhibiting C. acutatum; Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of Streptomyces isolates extracts in inhibiting C. acutatum; The Streptomyces isolation was carried out by dilution method using selective meida, namely Yeast Malt Agar. The Dual Culture method was used as an inhibition test between Streptomyces sp. and C. acutatum in vitro. A well diffusion method was used to test the effectiveness of the Streptomyces sp. and MIC filtrate concentration in inhibiting C. acutatum. The data obtained in this study were analyzed with Analysis of Varian (ANOVA) then continued with Duncan

Multiple Range Test with 5% significance. Five Streptomyces isolates were found, namely Streptomyces sp.1, Streptomyces sp.2, Streptomyces sp.3, Streptomyces sp.4, and Streptomyces sp.5 in the rhizosphere of healthy C. annum L. plants in Daup Village, Kintamani District, Bangli Regency. Streptomyces sp. isolates. can significantly inhibit the growth of the fungus C. acuatum with inhibitory power ranging from 50.30% to 83.76%, Streptomyces sp.5 isolate was able to provide the highest percentage of inhibition in C. acutatum of 83.76 ± 2.91% with MIC 7% (v/v) with a diameter of 6.40 mm.

Keywords: Colletotrichum acutatum, filtrate, MIC, Streptomyces sp.

PENDAHULUAN

Indonesia berupaya untuk membudidayakan tanaman yang mempunyai nilai ekonomis tinggi. Salah satu tanaman yang mempunyai nilai ekonomis tinggi adalah cabai. Kebutuhan cabai akan terus meningkat setiap tahun sejalan dengan meningkatnya jumlah penduduk dan berkembangnya industri pangan maupun bidang farmasi (Tsurayya & Kartika, 2015). Namun, kegagalan yang dialami oleh tanaman cabai merah besar diakibatkan oleh beberapa faktor seperti hama dan penyakit dan patogen yang sering ditemukan yaitu merupakan patogen tular tanah. Salah satu patogen tular tanah yang menyebabkan penyakit antraknosa pada tanaman cabai merah besar yaitu disebabkan oleh cendawan Colletotrichum acutatum yang sangat merugikan dan mengakibatkan cabai merah besar yang telah terserang tidak dapat dipasarkan akibat adanya bercak dan busuk (Sumardiyono et al., 2011).

Salah satu cara menangani permasalahan penyakit antraknosa adalah melalui pengendalian hayati patogen tanaman. Pengendalian hayati patogen tanaman sebagai upaya mengurangi kepadatan patogen yang disebabkan penyakit atau aktifitas patogen yang dapat menyebabkan penyakit tanaman. Pengendalian hayati melibatkan satu atau beberapa mikroorganisme antagonis (Muthahanas & Listiana, 2017). Bakteri Streptomyces sp. sering dipergunakan sebagai agen anti jamur karena memiliki metabolit primer maupun sekunder yang dapat membunuh jamur patogen (Sari et al., 2012). Khamna et al. (2009) melaporkan bahwa sifat antijamur ekstrak kasar S. spectabilis CMU-PA101 yang mampu menghambat pertumbuhan jamur Alternaria porri dan Colletotrichum

gloeosporioides yaitu dengan berubahnya bentuk morfologi dan hancurnya miselium. Manivasagan et al. (2015) menyatakan bahwa pada saat ini diperkirakan lebih dari 50% dari 11.900 jenis antibiotik yang sudah dikenal, diproduksi oleh galur dari Streptomyces.

Berdasarkan uraian diatas maka pada penelitian ini bertujuan untuk mengetahui keberadaan bakteri Streptomyces sp. di rizosfer tanaman cabai besar serta kemampuan isolat Streptomyces sp. dalam menghambat C. acutatum pada cabai penyebab penyakit antraknosa.

BAHAN DAN METODE

Waktu dan tempat penelitian

Waktu penelitian dilakukan dari 30 Desember 2019 hingga 28 Desember 2020. Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Mikrobiologi Program Studi Biologi FMIPA UNUD. Proses pengambilan sampel untuk mengisolasi bakteri Streptomyces yang berada pada rizosfer tanaman cabai merah besar di Desa Daup, Kecamatan Kintamani, Kabupaten Bangli, Bali pada lahan perkebunan tanaman cabai. Isolat C. acutatum yang didapatkan berasal dari koleksi di Laboratorium Biokimia Program Studi Biologi FMIPA UNUD.

Persiapan sampel

Sampel tanah diambil dari rizosfer jenis tanaman cabai merah besar (Capsicum annum L.) dengan kedalaman ± 15 cm sebanyak 100 g kemudian dimasukkan kedalam kantong plastic klip dan diberi label. Sampel dibawa ke Laboratorium Mikrobiologi Program Studi Biologi FMIPA UNUD untuk diteliti.

Isolasi dan Identifikasi bakteri Streptomyces

Tanah ditimbang secara aseptik sebanyak 10 g dan dimasukkan kedalam botol kaca dan diberi air steril hingga 100 mL, kemudian larutan tersebut dihomogenkan dengan menggunakan vortex. Dilakukan pengenceran berseri hingga 10-5 dan diambil 1 mL kemudian dituang pada Petri dish yang telah berisi media Yeast Malt Agar/International Streptomyces Project (ISP4). Setelah itu dilakukan inkubasi pada suhu 28°C selama 5 hari. Koloni yang tumbuh yang diduga sebagai Streptomyces berikutnya diuji dengan pewarnaan Gram untuk melihat apakah biakan mempunyai sifat Gram + atau -. Dilanjutkan observasi mikroskopik untuk melihat spora dan hifa. Pewarnaan tahan asam untuk membedakan kultur tersebut Streptomyces ataupun Nocardia, serta dilanjutkan uji katalase. Kultur murni berikutnya diidentifikasi dengan kunci determinasi dari buku Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology (Holt et al., 1994) berdasarkan struktur hifa serta konidia.

Re-isolasi jamur C. acutatum

Kultur murni C. acutatum merupakan koleksi dari Laboratorium Biokimia Prodi Biologi UNUD. Oleh sebab itu perlu dilakukan konfirmasi untuk memastikan kembali bahwa isolat tersebut adalah C. acutatum. Jamur C. acuatum diambil menggunakan jarum ose dan ditanam pada media PDA selanjutnya diinkubasi pada suhu 28°C selama 5 hari. Koloni yang tumbuh diamati secara mikroskopis dan makroskopis dan dicocokkan dengan ciri-ciri C. acutatum memiliki konidia berbentuk bulat silinder, hifa bersekat dan hifa bercabang pada buku Fungal Biodiversity (Crous et al., 2009).

Uji daya hambat isolat Streptomyces sp. terhadap jamur Colletotrichum acutatum secara in vitro

Koloni Streptomyces sp. dan C. acutatum dipotong menggunakan cork borer yang berukuran 5 mm. Kedua koloni tersebut diletakkan berhadapan dengan jarak 1 cm pada cawan Petri yang telah berisi media PDA dan

diinkubasi pada suhu 28°C (Montoc, 2011). Perlakuan dari masing-masing Streptomyces diulangi sebanyak empat kali. Perlakuan pada kontrol yaitu hanya menanam C. acutatum. Seluruh cawan Petri diinkubasi pada temperatur 28oC selama 5 hari. Persentase zona hambat yang terbentuk dihitung menggunakan metode Whipps (1987), yaitu:

Diameter koloni kontrol-diameter koloni perlakuan

Daya hambat = ame er o on on ro ame er o on per a uan ×100% Diameter koloni kontrol

Streptomyces terbaik dalam menghambat pertumbuhan jamur C. acutatum dari uji Dual Culture digunakan untuk uji selanjutnya.

Pembuatan filtrat Streptomyces sp.

Koloni Streptomyces sp. usia 5 hari dipotong menggunakan cork borer berukuran 5 mm kemudian dimasukkan 5 potongan koloni pada media Yeast Malt Broth sebanyak 100 mL pada Erlenmeyer. Selanjutnya diinkubasi pada suhu 28°C dan di homogenkan menggunakan shaker berbalasan dengan kecepatan 100 rpm selama 14 hari. Sel bakteri dipanen pada hari ke 14 dan dipisahkan dengan sentrifugasi pada kecepatan 11.000 rpm selama 15 menit untuk mendapatkan supernatan, kemudian disaring dengan filter ukuran 0,45 μm (Ramazani et al., 2013). Filtrat yang diperoleh kemudian dipartisi dengan memasukkan 100 mL filtrat ke dalam labu pemisah dan ditambahkan 100 mL pelarut n-butanol dengan perbandingan 1:1 (v/v). Kedua larutan dihomogenkan dan didiamkan selama 24 jam sampai fase air dan fase n- butanol terpisah. Fase n-butanol dievaporasi dengan mesin rotary evaporator dengan suhu 40°C hingga didapatkan sebanyak ± 5 mL filtrat yang dianggap sebagai konsentasi 100% (Kawuri et al., 2018). Filtrat yang didapat adalah filtrat kasar dari Streptomyces sp.5 dan hasil tersebut selanjutnya diuji secara in vitro terhadap C. acutatum dengan metode sumur difusi.

Uji aktifitas filtrat Streptomyces sp.5 terhadap

Colletotrichum acutatum

Uji aktifitas filtrat dilakukan dengan menumbuhkan C. acutatum selama 4 hari pada media PDA. Koloni C. acutatum diberikan air

steril sebanyak 5 mL kemudian dikeruk menggunakan ose, kemudian disaring menggunakan kertas saring 0,5 μm sehingga didapatkan suspensi spora. Suspensi spora dihitung menggunakan haemocytometer sehingga diperoleh kerapatan 1 x 106 spora/mL. Suspensi spora 200 μL dituang ke dalam cawan Petri dan ditambahkan media PDA dengan suhu 45°C, kemudian dihomogenkan dan dibiarkan memadat. Pada bagian tengah media dibuat sumur difusi dengan menggunakan cork borer berukuran 5 mm. Streptomyces sp.5 dimasukkan sebanyak 20μL kedalam sumur difusi, diinkubasi selama 5 hari pada suhu 28°C. Pengujian ini dilakukan dengan menggunakan metode sumur difusi dengan beberapa persentase filtrat (v/v) yaitu 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%. Pengujian Minimum Inhibitory Concentration (MIC) dimulai dari persentase filtrat 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5% dan n-butanol sebagai kontrol negatif serta fungisida sintetik Amistar yang biasanya digunakan sebagai anti jamur sebanyak 20 μg/mL sebagai kontrol positif. Masing – masing perlakuan diulang 3 kali ulangan dan diinkubasi pada suhu 28°C. Setelah inkubasi, diamati dan diukur diameter zona hambat yang dihasilkan oleh filtrat Streptomyces sp.5.

Rancangan Penelitian

Uji efektivitas filtrat Streptomyces sp. dengan C. acutatum menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 17 perlakuan meliputi konsentrasi 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%,6%, 5%, dan n-butanol sebagai kontrol negatif serta Fungisida sintetik Amistar sebagai kontrol positif dan 3 ulangan sehingga diperoleh total sampel sebanyak 51 sampel.

Analisis Data

Data dianalisis secara secara kualitatif dan kuantitatif. Secara kualitatif dilakukan dengan mendeskripsikan hasil pengamatan karakteristik makroskopis, mikroskopis, daya hambat dengan uji dual culture isolat Streptomyces sp. Secara kuantitatif dilakukan dengan menghitung zona

hambat yang terbentuk dari uji MIC filtrat Streptomyces sp.5 terhadap C. acutatum dengan ANOVA menggunakan software SPSS for windows versi 26. Analisis data dilanjutkan dengan uji Duncan Multiple Range Test dengan taraf signifikan 5% (P ≤ 0,05) karena hasil ANOVA menunjukan hasil berbeda nyata.

HASIL

Hasil pengamatan makroskopik jamur C. acutatum menunjukkan ciri – ciri yaitu memiliki diameter 63 mm pada media PDA pada hari ke-7. Koloni pada permukaan atas berwarna putih dengan pusat koloni berwarna keabuan tekstur halus seperti kapas (Gambar 1). Jamur ini terkonfirmasi sebagai penyebab penyakit antraknosa pada tanaman cabai merah besar setelah dilakukan uji Postulat Koch pada buah cabai merah besar.

Gambar 1. Morfologi makroskopik jamur C. acutatum dalam media Potato Dextrosa Agar masa inkubasi selama 7 hari, tampak atas (A) dan tampak bawah (B).

Pengamatan ciri mikroskopis jamur seperti ukuran, bentuk, septa diamati di bawah mikroskop cahaya dengan perbesaran 100x. Jamur C. acutatum memiliki makrokonidia berbentuk bulat silinder dengan panjangnya antara 9 - 10 x 2 - 3 μm sedangkan mikrokonidia berbentuk ovoid tidak bersepta, hifa bersekat dan bercabang. Karakteristik tersebut dibandingkan dengan buku Fungal Biodiversity (Crous et al., 2009) yang menyatakan bahwa makrokonidia berbentuk bulat silinder dengan ukuran 9 – 12 x 3,4 μm, mikrokonidia berbentuk ovoid dan tidak bersepta. Bentuk mikroskopik jamur C. acutatum dapat dilihat pada (Gambar 2).

Gambar 2. Morfologi Mikroskopis Jamur C. acutatum dengan

Mikroskop Cahaya Perbesaran 100x

Keterangan: a. spora, b. konidiofor, c. hifa bersepta d. hifa bercabang


Hasil isolasi Streptomyces pada rizosfer tanaman cabai merah besar sehat yang diperoleh berlokasi di Desa Daup, Kintamani, Bali dan dapat dikarakterisasi 5 isolat Streptomyces sp. yang memiliki perbedaan karakteristik makroskopis. Karakteristik dari masing-masing isolat adalah sebagai berikut:

  • 1.    Streptomyces sp.1

Koloni berbentuk bulat tidak beraturan dan berukuran kecil. Koloni melekat erat pada media, berwarna abu-abu dengan tepi koloni bergelombang dengan permukaan yang berlekuk dan teksturnya bertepung. Koloni mampu merubah warna media YMA dari merah menjadi tidak berwarna. Pengamatan secara mikroskopis konidia berbentuk oval, terdapat konidia yang tersusun berantai pada ujung hifa dengan diameter konidia 0,42 – 0,48 µm. Hifa bergelombang tidak bersepta dengan diameter hifa mencapai 0,63 – 0,78 µm dan isolat ini termasuk Gram positif (Gambar 3).

  • 2.    Streptomyces sp.2

Koloni berwarna putih pada bagian tengah sedangkan pada bagian tepi koloni berwarna hijau, berukuran kecil. Koloni berbentuk bulat tidak beraturan serta bergerombol dengan permukaan yang cembung. Tepi koloni bergelombang serta dapat merubah warna media menjadi tidak berwarna. Pengamatan secara

mikroskopis memiliki konidia berbentuk oval, terdapat konidia yang tersusun berantai pada ujung hifa dengan diameter konidia 0,47 – 0,52 µm. Hifa bergelombang tidak bersepta dengan diameter hifa mencapai 0,64 – 0,75 µm dan isolat ini termasuk Gram positif (Gambar 4).

Gambar 3. Bakteri Streptomyces sp.1 (A) Koloni pada

media YMA dengan usia kultur 7 hari, (B) gambar mikroskopis Streptomyces sp.1 dengan Mikroskop Cahaya pada perbesaran 1000x (a) hifa (b) konidia.

Gambar 4. Bakteri Streptomyces sp.2 (A) Koloni pada media YMA dengan usia kultur 7 hari, (B) gambar mikroskopis Streptomyces sp.2 dengan Mikroskop Cahaya pada perbesaran 1000x (a) konidia (b) hifa.

  • 3.    Streptomyces sp.3

Koloni berbentuk bulat dengan tepi tidak beraturan. Koloni melekat erat pada media, berwarna hijau dengan permukaan yang menonjol dan teksturnya bertepung. Koloni mampu merubah warna media dari merah menjadi tidak berwarna. Pengamatan secara mikroskopis memiliki konidia berbentuk oval, terdapat konidia yang tersusun berantai pada ujung hifa dengan diameter konidia 0,40 – 0,45 µm. Hifa bergelombang tidak bersepta dengan diameter hifa mencapai 0,46 – 0,87 µm dan isolat ini termasuk Gram positif (Gambar 5).

Gambar 5. Bakteri Streptomyces sp.3 (A) Koloni pada media YMA dengan usia kultur 7 hari, (B) gambar mikroskopis Streptomyces sp.3 dengan Mikroskop Cahaya pada perbesaran 1000x (a) konidia (b) hifa.

  • 4.    Streptomyces sp.4

Koloni berbentuk bulat, melekat erat pada media, berwarna merah muda dengan tepi koloni rata dengan permukaan yang cembung dan teksturnya bertepung. Koloni mampu merubah warna media dari merah menjadi tidak berwarna. Pengamatan secara mikroskopis memiliki konidia berbentuk oval, terdapat konidia yang tersusun berantai pada ujung hifa dengan diameter konidia 0,42 – 0,47 µm. Hifa bergelombang tidak bersepta dengan diameter hifa mencapai 0,62 – 0,67 µm dan isolat ini termasuk Gram positif (Gambar 6).

  • 5.    Streptomyces sp.5

Koloni berbentuk bulat, melekat erat pada media, berwarna abu-abu dengan tepi koloni bergelombang dengan permukaan yang cekung dan teksturnya bertepung. Koloni mampu

merubah warna media dari merah menjadi tidak berwarna. Pengamatan secara mikroskopis memiliki konidia berbentuk bulat, terdapat konidia yang tersusun berantai pada ujung hifa dengan diameter konidia 0,55 – 0,58 µm. Hifa bergelombang tidak bersepta dengan diameter hifa mencapai 0,30 – 0,45 µm dan isolat ini termasuk Gram positif (Gambar 7).

Gambar 6. Bakteri Streptomyces sp.4 (A) Koloni pada media YMA dengan usia kultur 7 hari, (B) gambar mikroskopis Streptomyces sp.4 dengan Mikroskop Cahaya pada perbesaran 1000x (a) konidia (b) hifa.

Gambar 7. Bakteri Streptomyces sp.5 (A) Koloni pada media YMA dengan usia kultur 7 hari, (B) gambar mikroskopis Streptomyces sp.5 dengan Mikroskop Cahaya pada perbesaran 1000x (a) konidia (b) hifa.

Hasil dari pewarnaan tahan asam, pewarnaan Gram, dan uji katalase dari seluruh isolat menunjukan bahwa isolat tersebut merupakan bakteri Streptomyces (Tabel 1). Hasil uji Dual Culture menunjukkan bahwa semua bakteri Streptomyces yang diisolasi dari rizosfer tanaman cabai merah besar dapat menghambat C. acutatum (Gambar 8, Tabel 2).

Tabel 1. Hasil pewarnaan tahan asam, pewarnaan gram dan uji katalase isolat Streptomyces sp.

No.

Isolat           Pewarnaan tahan asam    Pewarnaan Gram   Uji katalase

  • 1.

  • 2.

  • 3.

  • 4.

5.

Streptomyces sp.1                   -                        +                 +

Streptomyces sp.2                   -                        +                 +

Streptomyces sp.3                   -                        +                 +

Streptomyces sp.4                   -                        +                 +

Streptomyces sp.5                   -                        +                 +



Gambar 8. Uji Dual Culture Streptomyces sp. terhadap C. acutatum secara in vitro, a. Streptomyces sp.1, b. Streptomyces sp.2, c. Streptomyces sp.3, d. Streptomyces sp.4, e. Streptomyces sp.5, dan f. kontrol C. acutatum.

Tabel 2. Persentase hambatan oleh Streptomyces sp. terhadap pertumbuhan C. acutatum dalam uji in vitro Dual Culture

No.

Isolat

%Hambatan**

1.

Kontrol

0,00 ± 0,00a

2.

Streptomyces sp. 1

72,23 ± 3,25c

3.

Streptomyces sp. 2

67,13 ± 5,08c

4.

Streptomyces sp. 3

68,36 ± 10.82c

5.

Streptomyces sp. 4

50,30 ± 4,58b

6.

Streptomyces sp. 5

83,76 ± 2.91d

**Nilai-nilai pada tabel 2 ± standar deviasi merupakan rata-rata dari empat kali ulangan. Nilai-nilai yang diikuti huruf yang sama menunjukkan hasil yang tidak berbeda nyata berdasarkan uji Duncan setelah dilakukan uji analisis sidik ragam (ANOVA)

Uji filtrat N-butanol Streptomyces sp.5 terhadap jamur C. acutatum diperoleh hasil filtrat mampu menghambat pertumbuhan jamur uji.

Hasil daya hambat ditunjukkan filtrat yang dilarutkan dengan pelarut N-butanol, yaitu sebesar 21,50 ± 0,44 mm pada konsentrasi 100%. Fungisida sintetik Amistar yang digunakan sebagai kontrol positif menghasilkan diameter zona hambat terbesar 30,54 ± 0,35 mm. Pada kontrol negatif yaitu N-butanol tidak terdapat zona hambat. Hasil MIC ditemukan pada konsentrasi 7% dengan diameter sebesar 6,40 mm. Perlakuan filtrat Streptomyces sp.5 secara nyata (P<0,05%) dapat menghambat pertumbuhan jamur uji. Hal ini menunjukkan bahwa terdapat pengaruh variasi konsentrasi filtrat terhadap lebar diameter zona hambat yang dihasilkan, semakin besar konsentrasi filtrat maka semakin lebar diameter zona hambat yang dihasilkan (Gambar 9 dan Tabel 3).

Gambar 9. Uji konsentrasi filtrat N-butanol Streptomyces sp.5 dengan C. acutatum a (kontrol positif dan kontrol negatif), b (perlakuan 5% - 9%), c (perlakuan 10% -50%), d (perlakuan 60-100%).


Filtrat N-butanol dari Streptomyces sp. 5 dilakukan uji efektivitas dalam menghambat C. acutatum. Dari uji yang dilakukan, konsentrasi 100% - 7% terdapat zona hambat, yaitu 21,50 ± 0,44 mm sampai dengan 6,40 ± 0,16 mm (Tabel 3).

Tabel 3. Uji Minimum Inhibitory Concentration dari Filtrat Streptomyces sp.5

No.

Isolat

Diameter (mm)**

1.

Kontrol Positif

30,54 ± 0,35n

2.

Konsentrasi 100%

21,50 ± 0,44m

3

Konsentrasi 90%

19,29 ± 0,27l

4.

Konsentrasi 80%

18,37 ± 0,43k

5.

Konsentrasi 70%

17,35 ± 0,15j

6.

Konsentrasi 60%

16,50 ± 0,44i

7.

Konsentrasi 50%

14,21± 0,25h

8.

Konsentrasi 40%

13,48 ± 0,30g

9.

Konsentrasi 30%

11,40 ± 0,40f

10.

Konsentrasi 20%

10,45 ± 0,22e

11.

Konsentrasi 10%

9,78 ± 0,17d

12.

Konsentrasi 9%

7,31 ± 0,35c

13.

Konsentrasi 8%

6,69 ± 0,35b

14.

Konsentrasi 7%

6,40 ± 0,16b

15.

Konsentrasi 6%

0,00 ± 0,00a

16.

Konsentrasi 5%

0,00 ± 0,00a

17.

Kontrol Negatif

0,00 ± 0,00a

**Nilai-nilai pada tabel ± standar deviasi merupakan rata-rata dari tiga kali ulangan. Notasi huruf yang berbeda di setiap kolom menunjukkan perlakuan berbeda nyata (P≤ 0,05), berdasarkan uji Duncan setelah analisis sidik ragam (ANOVA).

PEMBAHASAN

Hasil yang ditunjukan pada Gambar 1 dan Gambar 2 tentang ciri morfologi makroskopis dan mikroskopis C. acutatum serupa dengan yang dilaporkan oleh Ibrahim et al. (2017), bahwa pada media PDA, pertumbuhan koloni C. acutatum yang lambat memiliki ciri morfologi miselium yang berwarna putih pusat koloni berwarna abu-

abu seperti kapas dan halus serta tepi koloni yang rata. Koloni yang sudah tua akan terdapat noda hitam pada permukaan koloni. Hasil sesuai dengan buku identifikasi Fungal Biodiversity (Crous et al., 2009). Berdasarkan pada karakteristik tersebut, maka isolat yang dipakai pada penelitian ini terkonfirmasi sebagai Colletotrichum acutatum. Hal ini didukung oleh hasil penelitian Anggraeni et al. (2019) dimana hasil pengamatan C. acutatum dibawah mikroskop cahaya menunjukkan ciri-ciri yaitu jamur Colletotrichum memiliki konidia hialin dengan 1 sel, berbentuk ovoid hingga sabit sedangkan pada C. acutatum memiliki bentuk konidia elips hingga gelendong, terdapat makrokonidia berbentuk silindris atau ujung tumpul sedangkan mikrokonidia berbentuk ovoid. Konidiofor bercabang dan bersekat.

Isolasi Streptomyces pada rizosfer tanaman cabai merah besar (Capsicum annum L.) diperoleh 5 isolat Streptomyces sp. dengan struktur mikroskopis dan makroskopis yang berbeda. Kelima isolat Streptomyces yang diperoleh memiliki bentuk koloni, warna dan struktur permukaan yang berbeda-beda. Widyanti & Giyanto (2013) mengemukakan bahwa koloni Streptomyces mempunyai ukuran diameter yang kecil, awal pertumbuhan permukaan koloni licin, kemudian membentuk miselium udara yang bentuknya seperti bubuk. Kumalasari et al. (2012) menunjukkan bahwa koloni Streptomyces menghasilkan bau yang khas seperti tanah, yang disebabkan oleh produksi asam asetat, acetildehida, etanol, isobutanol dan isobutyl asetat.

Isolat Streptomyces sp. secara nyata (P>0,05) dapat menghambat pertumbuhan jamur C. acuatum dengan daya hambat berkisar 53,5% sampai dengan 83,76%. Variasi persentase daya hambat terbentuk disebabkan oleh perbedaan kemampuan antagonis masing-masing isolat Streptomyces dalam menghambat pertumbuhan jamur patogen. Perbedaan ini juga dapat dipengaruhi oleh produksi siderophore (Palaniyandi et al., 2011), antibiosis (Purnomo et al., 2017), atau dengan senyawa toksik lainnya seperti HCN (Amaresan et al., 2018).

Streptomyces sp.5 merupakan isolat yang memiliki persentase terbesar yaitu 83,76% dalam menghambat pertumbuhan patogen. Hal serupa juga dilaporkan oleh peneliti lain, seperti Yurnaliza et al. (2011) yang melaporkan bahwa bakteri Streptomyces RKt5 sangat efektif menghambat patogen tular tanah. Kemampuan kitinase dari Streptomyces RKt5 mampu melisiskan dinding sel dari miselium jamur F. oxysporum. Bakteri antagonis Streptomyces sp. merupakan genus bakteri yang mendominasi di lingkungan rizosfer. Menurut Yutthasin et al. (2015) menyatakan bahwa melalui pengujian secara in vitro C. acutatum pertumbuhannya mampu dihambat oleh enzim hidrolitik yang dihasilkan oleh Streptomyces PR22 dan Streptomyces PR87 sehingga terjadi pelisisan dinding sel fungi.

Minimum Inhibitory Concentration (MIC) dari Streptomyces sp.5 yaitu pada konsentrasi 7% sebesar 6,40 mm. Hal ini sesuai dengan Nurkanto dkk, (2010) mengemukakan bahwa semakin rendah nilai MIC dari filtrat maka filtrat yang diuji memiliki potensi antijamur. Hal ini disebabkan oleh semakin kecil konsentrasi, filtrat tersebut masih mampu menunjukkan zona hambat. Penelitian Nguyen et al. (2015) menyatakan bahwa filtrat S. griseus H7602 menghasilkan asam 1H-pirol-2karboksilat (PCA) dengan menggunakan analisis spektra mampu menghambat P. capsici secara in vitro dengan nilai konsentrasi hambat minimum sebesar 64 μg mL. Streptomyces deccanensis QY-3 menunjukkan aktivitas antijamur yaitu asam

antranilat dan sangivamycin yang dapat menghambat perkecambahan konidia serta dapat mematahkan hifa dari C. gloeosporioide dengan nilai MIC masing-masing kedua senyawa yaitu 29,3 dan 23,0 μg mL. (Gu et al., 2020).

SIMPULAN

Ditemukan 5 isolat Streptomyces yaitu

Streptomyces    sp.1,    Streptomyces    sp.2,

Streptomyces    sp.3,    Streptomyces    sp.4,

Streptomyces sp.5. Isolat – isolat Streptomyces sp. secara nyata dapat menghambat pertumbuhan jamur C. acuatum dengan daya hambat berkisar 53,5 sampai dengan 83,76% . Streptomyces sp.5 mampu memberikan persentase hambatan pada C. acutatum sebesar 83,76 ± 2,91% dengan MIC 7% (v/v) dengan diameter 6,40 mm.

UCAPAN TERIMA KASIH

Penulis mengucapkan terima kasih kepada Bapak Dr. Sang Ketut Sudirga, S.Si., M.Si selaku Kepala Laboratorium Biokimia Program Studi Biologi FMIPA Universitas Udayana yang telah menyediakan isolat C. acutatum, serta Drs. Yan Ramona, M.App.Sc. dan Ph.D, Dr. Dra. Junita Hardini, M.Si. atas masukannya pada penelitian ini.

KEPERPUSTAKAAN

Amaresan N, Kumar K, Naik JH, Bapatla KG,

Mishra RK. 2018. Streptomyces in Plant Growth Promotion Mechanisms and Role. New and Future Developments in Microbial Biotechnology and Bioengineering. 125-135.

Anggraeni W, Wardoyo ERP, Rahmawati. 2019.

Isolasi dan Identifikasi Jamur Pada Buah Cabai rawit (Capsicum frutescens L.) yang Bergejala Antraknosa Dari Lahan Pertanian Di Dusun Jeruk. Jurnal Protobiont. 8(2): 94:100.

Cihak M, Kamenik Z, Smidova K, Bergman K, Benada O, Kofronova O, Petricknova K, Bobek J. 2017. Secondary Metabolites Produced during the Germination of Streptomyces coelicolor. Frontiers in Microbiology. 2495(8): 1-8.

Crous PW, Verkley GJM, Groenewald JZ, Samson RA. 2009. Fungal Biodiversity. CBS KNAW Fungal Biodiversity Center Utrecht, the Netherlands.

Gu L, Zhang K, Zhang N, Li X, Liu Z. 2020. Control of the Rubber Anthracnose Fungus Colletotrichum gloeosporioides using Culture Filtrat Extract from Streptomyces deccanensis QY-3. 113(11): 1573-1585.

Holt JG, Krieg NP, Sneath PHA, Staley JT, Williams ST. 1994. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology.  9th Edition.

Lippincott Williams and Wilkins. New York

Ibrahim R, Hidayat SH, Widodo. 2017. Keragaman Morfologi, Genetika, dan Patogenisitas Colletotrichum acutatum Penyebab Antraknosa Cabai di Jawa dan Sumatera. Jurnal Fitopatologi Indonesia. 13(1): 9-16.

Kawuri R. 2012. Pemanfaatan Streptomyces thermocarboxydus untuk Mengendalikan Penyakit Busuk Daun pada Lidah Buaya (Aloe barbadensis Mill.) di Bali. (Disertasi). Universitas Udayana. Bali.

Kawuri R, Suprapta DN, Nitta Y. 2018. Antagonistic Activity of Streptomyces thermocarboxydus to Fusarium oxysporum: The cause of Leaf Rot Disease on Aloe Vera (Aloe barbadensis Mill.) in Bali, Indonesia. Malaysian Journal of Microbiology. 10-15.

Khamna S, Yokota A, Lumyong S. 2009. Actinomycetes Isolated from Medicinal Plant Rhizosphere Soil: Diversity and Screening of Antifungal Compound, Indole-3-Acetic Acid and Siderophore Production. World Journal Microbiology and Biotechnology. 25(4):649-655.

Kumalasari AM, Fathurahman N, Nur M. 2012. Potensi Actinomycetes Sebagai Sumber Senyawa Bioaktif Antibiotik dari Kawasan Karst Bantimurung, Sulawesi Selatan. Pelita-Jurnal Penelitian Mahasiswa UNY. 7(1): 59-72.

Montoc HS. 2011. Uji Antagonisme Saccharomyces sp. dan Pseudomonas aeruginosa Terhadap Sembilan Jamur Patogen. Jurusan Hama dan Penyakit Tumbuhan. Skripsi  Sarjana.   Fakultas

Pertanian. Universitas Udayana

Muthahanas I, Listiana E. 2017. Skrining Streptomyces sp. Isolat Lombok Sebagai

Pengendali Hayati Beberapa Jamur Patogen Tanaman. CROP AGRO Scientific Journal of Agronomy. 1(2): 130-136.

Nellawati NLCA, Kawuri R, Arpiwi NL. 2016. Uji Daya Hambat Streptomyces roseoflavus AL2 Terhadap Xanthomonas sp. Penyebab Penyakit Hawar Daun Bakteri (HBD) pada Tanaman Padi   (Oryza   sativa L.).

Metamorfosa:   Journal of Biological

Sciences. 3(1): 1-7.

Nguyen XH, Naing KW, Lee YS, Kim YH, Moon JH, Kim KY. 2015. Antagonism of Antifungal Metabolites from Streptomyces griseus H7602 against Phytophthora capsici. Journal of Basic Microbiology. 55(1): 45-53.

Nurkanto A, Listyaningsih F, Julistiono H, Agusta     A.     2010.     Eksplorasi

Keanekaragaman Aktinomisetes Tanah Ternate Sebagai Sumber Antibiotik. Jurnal Biologi Indonesia. 6(3): 325-339.

Palaniyandi SA, Yang SHD, Cheng JH, Meng L, Suh JW. 2011. Biological control of anthracnose                (Colletotrichum

gloeosporioides) in yam Streptomyces sp. MJM5763. Journal of applied microbiology. 111(2): 443-455.

Pertiwi PH, Lukiswanto BS, Rochmah K. 2015. Isolasi dan Identifikasi dan Penapisan Aktivitas Antimikroba Streptomyces sp. Isolat Tanah Lumpur Lapindo Sidoarjo. Veterinari Medika. 8(1): 51-58.

Purnomo E, Mukarlina, Rahmawati. 2017. Uji Antagonis Bakteri   Streptomyces   spp.

Terhadap Jamur Phytophthora palmivora BBK10 Penyebab  Busuk Buah  pada

Tanaman Kakao. Protobiont. 6(3): 1-7.

Ramazani A, Moradi S, Sorouri R, Javani S, Garshasbi M. 2013. Screening for Antibacterial Activity of Streptomyces Species Isolated from Zanjan Province, Iran. IJPCBS. 3(2): 342-349.

Sari DR. 2015. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Tanah yang Terdapat di Sekitar Perakaran Tanaman. Jurnal Bio-Site. 1(1): 21-27.

Sari NM, Kawuri R, Khalimi K. 2012. Streptomyces sp. Sebagai Biofungisida Patogen Fusarium oxysporum (Schlecht) f.sp. lycopersici (Sacc.) Snyd. Et Hans. Penyebab Penyakit Layu pada Tanaman Toman (Solanum lycopersicum L.).

Agrotrop: Journal on Agriculture Science. 2(2): 161-169.

Soeka YS, Triana, E. 2016. Pemanfaatan Limbah Kulit Udang untuk Menghasilkan Enzim Kitinase dari Streptomyces macrosporeus InaCC A454. Jurnal Kimia Terapan Indonesia (Indonesian Journal of Applie Chemistry). 18(1): 91-101

Sumardiyono C, Joko T, Kristiawati Y, Chinta YD. 2011. Diagnosis dan Pengendalian Penyakit Antraknosa pada Pakis dengan Fungisida. Jurnal Hama dan Penyakit Tumbuhan Tropika. 11(2): 194-200.

Tsurayya S, Kartika L. 2015. Kelembagaan dan Strategi Peningkatan Daya Saing Komoditas Cabai Kabupaten Garut. Jurnal Manajemen & Agribisnis. 12(1): 1-13.

Whipps JM. 1987. Effect of Media on Growth and Interactions between a Range of Soil-Borne Glasshouse Pathogens and Antagonistic Fungi. The New Phytologist. 107(1): 127142.

Widyanti N, Giyanto. 2013. Kemampuan Aktinomiset Menghambat Pertumbuhan Sclerotium rolfsii dan Pembiakannya pada Medium Serbuk Gergaji. Jurnal Fitopatologi Indonesia. 9(1): 7-14.

Yurnaliza Y, Margino S, Sembiring L. 2011. Kemampuan Kitinase Streptomyces RKt5 sebagai Antijamur terhadap Patogen Fusarium oxysporum. Jurnal Natur Indonesia. 14(1): 42-46.

Yutthasin R, Thummabenjapone P, Hiransalee A. 2015. Antagonistic Streptomyces Selection to Broad Spectrum for Biological Control of Colletotrichum spp., Causal Agent of Anthracnose in Chilli. Journal of Pure and Applied Microbiology. 9(4): 2705-2715.

207